Krevní nátěry zhotovujeme z čerstvě odebrané plné krve anebo, pokud nemáme možnost udělat nátěr ihned po odběru, z krve stabilizované antikoagulačními (protisrážlivými) látkami. Nejvhodnějším antikoagulans pro tento účel je EDTA nebo heparin.

Podložní sklíčko, na které budeme dělat nátěr, by mělo být dokonale čisté, odmaštěné a suché. Jako roztěrové sklíčko je nejlépe použít sklíčko se zabroušenými hranami, které zaručí vhodnou šířku roztěru. Pokud jej nemáme k dispozici, lze použít i krycí sklíčko nebo další podložní sklíčko.

Při roztírání je vhodnější položit sklíčko na stůl. Rukou, kterou budeme sklíčko přidržovat se snažíme nedotýkat se plochy sklíčka, ale držet ho pouze ze stran. Na kraj podložního sklíčka kápneme přiměřeně velkou kapku krve, přibližně 0,5 - 1 cm od okraje. Pro praváky je lepší udělat kapku na pravém okraji a nátěr táhnout směrem doleva, pro leváky naopak.

Roztěrové sklíčko přiložíme jakoby před kapku (pokud je na pravém okraji, tak sklíčko přikládáme z levé strany kapky) a posuneme ho ke kapce, až se celá rozlije podél hrany roztěrového sklíčka. Poté sklíčkem roztíráme krev rovnoměrným, plynulým pohybem v postupně více ostrém úhlu od 45° do 30°. Čím je úhel ostřejší (a kratší doba roztěru), tím je nátěr tenčí. Nikdy neroztíráme krev před sklíčkem, ale jakoby ji táhneme za roztěrovým sklíčkem. V opačném případě se krevní buňky ničí.

Ideální nátěr je rovnoměrně se ztenčující a přibližně 3 – 6 cm dlouhý. Sklíčko nezapomeneme označit tužkou na zabroušené straně nebo pomocí lepícího štítku.

Nátěr před barvením musíme nechat dokonale uschnout. Zpočátku je vhodné pokud nátěr zaschne rychleji (fénem, nad radiátorem, v termostatu apod.), aby buňky nezměnily tvar. Citlivé jsou především erytrocyty. Poté několik hodin dosušujeme.


Fixace krevních nátěrů
 

Krevní nátěry fixujeme methylalkoholem (methanolem). Nátěry můžeme do methanolu vložit na 10 minut nebo je ve vodorovné poloze methanolem pokapat a čekat do odpaření.
Pokud budeme barvit nátěry v krátké době po zhotovení preparátu, není nutné tuto samostatnou fixaci dodržet, neboť používaná barviva mají současně fixační schopnost.
 

Barvení krevních nátěrů
 

Standardním barvením pro krevní nátěry je tzv. panoptické barvení dle Pappenheima.
 

Postup barvení:

1. Celý nátěr na 3 minuty pokryjeme May-Grünwaldovým barvivem.
2. Opatrně přikapáváme destilovanou vodu tak, aby se původní barvivo nesmylo. Cílem je nechat působit takto naředěné barvivo (1:1) další 1 minutu.
3. Barvivo slijeme, můžeme opláchnout vodou.
4. Na nátěr naneseme Giemsa-Romanowského barvivo. Toto barvivo musí být před barvením vždy čerstvě naředěné přibližně 1:9 (na 10 ml destilované vody 10 - 15 kapek barviva). Necháme působit přibližně 15 minut (10 - 20 minut).
5. Barvivo slijeme a důkladně opláchneme pod tekoucí vodou.
6. Spodní stranu sklíčka očistíme utěrkou.
7. Je vhodné ihned zkontrolovat probarvenost krevních buněk a eventuelně preparát ještě dobarvit.
 

home